实验试剂

DMEM培养基

胎牛血清

PBS

BD24孔细胞培养板

Raininpipettips,1ml

戊二醛

乙醇

结晶紫

实验设备

细胞培养仪：37°Cand5%CO₂

实验材料

人MDA-MB-231cell

实验步骤

1. 细胞在含有10%FBS的DMEM培养基中生长。

2. 细胞以一定密度接种到24孔细胞培养板中，生长24小时后，单层细胞融合度应达到70-80%。

3. 不要更换培养基。用新的1ml枪头轻轻的在单层培养细胞间划痕，划痕横穿过孔，枪头尽量与板孔的底部垂直，不要倾斜。这样产生的gap的距离才与枪头末端的外直径相等。Gap的距离可以选用不同型号的枪头调节。划痕在同一方向成一条直线。

4. 在垂直与第一条划痕的方向制作另一条划痕，每孔划痕成十字交叉型。

5. 划痕后，用培养基轻轻的清洗板孔2次，以去除脱落细胞。

6. 每孔添加新鲜培养基。

7. (培养基中含有某些成分，如抑制/促进细胞迁移和/或增殖的化学物质)。

8. 细胞生长48小时(或根据时间需要)。

9. 1xPBS清洗细胞两次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分钟。

10. 0.1%的结晶紫(2%乙醇溶解)染色30分钟。

11. 染色的单层细胞选取不同的视野，显微镜拍照。gap的距离可通过Photoshop或ImagJ软件测量.为了降低实验结果的可变性，建议每孔选择多个视野观察，每组做多个重复。