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常用染色液的配置

2015-07-08

 

实验步骤

 

  
一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液 
  A液:美蓝(methylene blue) 0.6g
  95%酒精 30ml
  B液:KOH 0.01g
  蒸馏水 100ml
  分别配制A液和B液,配好后混合即可。
  
二、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
  A液:碱性复红(basic fuchsin) 0.3g
  95%酒精 10ml
  B液:石炭酸 5.0g
  蒸馏水 95ml
  将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入95%酒精,继续研磨使其溶解,配成A液。
  将石炭酸溶解于水中,配成B液。
  混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5—10倍使用,稀释液易变质失效,一次不宜多配。
  
三、革兰氏(Gram)染色液
  1.草酸铵结晶紫染液
  A液:结晶紫(crystal violet) 2g
  95%酒精 20ml
  B液:草酸铵(ammonium oxalate) 0.8g
  蒸馏水 80ml
  混合A、B二液,静置48小时后使用。
  2.卢戈氏(Lugol)碘液
  碘片 1.0g
  碘化钾 2.0g
  蒸馏水 300ml
  先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘全溶后,加足水分即成。
  3.95%的酒精溶液。
  4.番红复染液
  番红(safranine O) 2.5g
  95%酒精 100ml
  取上述配好的番红酒精溶液10ml与80ml蒸馏水混匀即成。
  
四、芽孢染色液 
  1.孔雀绿染液
  孔雀绿(malachite green) 5g
  蒸馏水 100ml
  2.番红水溶液
  番红 0.5g
  蒸馏水 100ml
  3.苯酚品红溶液
  碱性品红 11g
  无水酒精 100ml
  制法取上述溶液10ml与100ml5%的苯酚溶液混合,过滤备用。
  4.黑色素(nigrosin)溶液
  水溶性黑色素 10g
  蒸馏水 100ml
  称取10g黑色素溶于100ml蒸馏水中,置沸水浴中30分钟后,滤纸过滤
  二次,补加水到100ml,加0.5ml甲醛,备用。
  
五、荚膜染色液 
  1.黑色素水溶液
  黑色素 5g
  蒸馏水 100ml
  福尔马林(40%甲醛) 0.5ml
  将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟,然后加入福尔马林作防腐剂。
  2.番红染液
  与革兰氏染液中番红复染液相同。
  
六、鞭毛染色液 
  A液:单宁酸 5g
  FeCl3 1.5g
  蒸馏水 100ml
  福尔马林(15%) 2.0ml
  NaOH(1%) 1.0ml
  配好后,当日使用,次日效果差,第三日则不宜使用。
  B液:AgNO3 2g
  蒸馏水 100ml
  待AgNO3溶解后,取出10ml备用,向其余的90mlAgNO3中滴入浓NH4ON,使之成为很浓厚的悬浮液,再继续滴加NH4OH,直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将备用的10mlAgNO3慢慢滴入,则出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状沉淀又消失,再滴入AgNO3,直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。如所呈雾不重,此染剂可使用一周,如雾重,则银盐沉淀出,不宜使用。
 

七、富尔根氏核染色液
  1.席夫氏(Schiff)试剂
  将1g碱性复红加入200ml煮沸的蒸馏水中,振荡5分钟,冷至50℃左右过滤,再加入1mol/LHC120ml,摇匀。待冷至25℃时,加Na2S2O5(偏重亚硫酸钠)3g,摇匀后装在棕色瓶中,用黑纸包好,放置暗处过夜,此时试剂应为淡黄色(如为粉红色则不能用),再加中性活性炭过滤,滤液振荡1分钟后,再过滤,将此滤液置冷暗处备用(注意:过滤需在避光条件下进行)。
  在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥,以消除还原性物质。
  2.Schandium固定液
  A液:饱和升汞水溶液
  50ml升汞水溶液加95%酒精25ml混合即得。
  B液:冰醋酸
  取A液9毫升 B液1毫升,混匀后加热至60℃。
  3.亚硫酸水溶液
  10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml,1mol/LHCl5ml,加蒸馏水100ml混合即得。
  
八、Bouin氏固定液 
  苦味酸饱和水溶液 75ml
  福尔马林(40%甲醛) 25ml
  冰醋酸 5ml
  1g苦味酸可制成75ml饱和水溶液。
  先将苦味酸溶解成水溶液,然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。
  
九、乳酸石炭酸棉蓝染色液
  石炭酸 10g
  乳酸(比重1.21) 10ml
  甘油 20ml
  蒸馏水 10ml
  棉蓝(cottonblue) 0.02g
  将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解,然后加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,使其溶解即成。
  
十、瑞氏(Wright)染色液 
  瑞氏染料粉末 0.3g
  甘油 3ml
  甲醇 97ml
  将染料粉末置于干燥的乳缽内研磨,先加甘油,后加甲醇,放玻璃瓶中过夜,过滤即可。
  十一、美蓝(Levowitz-Weber)染液 (实验62)
  在52ml95%酒精和44ml四氯乙烷的三角烧瓶中,慢慢加入0.6g氯化美蓝(met hylene blue chloride),旋摇三角烧瓶,使其溶解。放5—10℃下,12—24小时,然后加入4ml冰醋酸。用质量好的滤纸如WhatmanNo.42或与之同质量的滤纸过滤。贮存于清洁的密闭容器内。